ACTI¹

(1) Área Científica y Técnica de Investigación (ACTI). Instituto Murciano de Investigación Biosanitaria (IMIB). Universidad de Murcia.

El Comité Internacional para la Autentificación de Líneas Celulares (http://iclac.org/) recomienda incorporar la autentificación en la práctica rutinaria con cultivos celulares, puesto que se tiene constancia de que un alto porcentaje de los trabajos con células (alrededor de un 15% en el caso de células humanas) se ha realizado con líneas erróneamente identificadas (https://www.nature.com/articles/492186a). Numerosas revistas científicas de alto impacto exigen este tipo de analítica de control en sus publicaciones. Especialmente emblemático es el caso del International Journal of Cancer (https://doi.org/10.1371/journal.pbio.2001438). Las plataformas IMIB de Cultivo de Tejidos, Biología Molecular y Apoyo Estadístico, en colaboración con la empresa Bioidentity S.L., presentaron hace dos años una nueva herramienta -que asumiendo los criterios del American National Standard Institute (ANSI/ATCC ASN-0002-2011) para la verificación de la identidad de las líneas celulares- ponía el foco en la necesidad de incorporar 7 marcadores genéticos adicionales del tipo microsatélites o STR en los análisis de autentificación. Sin embargo, la autentificación mediante microsatélites no permite descartar la contaminación con líneas no humanas, ya que queda restringida a un número muy reducido de especies y solo excluye la contaminación intra-especie. La técnica de “DNA Barcodes” es un procedimiento válido de identificación molecular de especies en cultivos celulares, que se puede aplicar a un importante número de líneas de muy diversos orígenes: mamíferos, peces, pájaros, anfibios e insectos.

Se han analizado mediante STR 111 líneas celulares humanas, de las cuales 37 provinieron de la propia plataforma de Cultivo de Tejidos, 13 de grupos de investigación del IMIB, 5 de departamentos de la Universidad de Murcia y las 56 restantes de otros cinco centros de investigación públicos de Murcia, Alicante y Valencia (Figura 1.- Informe estándar de autentificación). Las muestras misidentified o cross-contaminated se sometieron a un ensayo de “DNA Barcodes” (https://doi.org/10.1007/s11626-007-9060-2).

Del total de muestras analizadas, se puede asegurar que al menos un 7,2% corresponde a líneas identificadas erróneamente por el investigador (misidentified) y un 0,9% a contaminaciones cruzadas (cross-contaminated) (Tabla de resultados). DNA Barcodes permitió descartar una contaminación adicional con líneas celulares de otras especies.

La autentificación de líneas celulares requiere de métodos complementarios que permitan resolver casos dudosos dentro de la especie y descartar contaminación intra-especie. La incorporación de 7 microsatélites a los 8 que establece el procedimiento estándar propugnado por ANSI/ATCC da respuesta al primer problema. Por otra parte, nuevos métodos de análisis como “DNA Barcodes” amplían el espectro de autentificación a nuevas especies. Las 37 líneas celulares provenientes de la plataforma de Cultivos de Tejidos del IMIB superaron los test de autentificación, verificándose su identidad y procedencia correctas. Al tratarse de una unidad que observa con rigor la Good Cell Culture Practice, se puede concluir la importancia de observar estas prácticas para evitar contaminaciones cruzadas y obtener resultados fiables en una investigación de calidad.