Antonio José Ruiz Alcaraz¹, Tamara Nadira Ramírez Pavez¹, Cristian Ríos Campillo², María Vera³, Francisco Ródenas³, Antonio Girado³, María Concepción Martínez-Esparza Alvargonzález¹, Maria Pilar García Peñarrubia⁴

(1) INMUNIDAD INNATA EN LA SALUD Y LA ENFERMEDAD, IMIB, España
(2) Grupo de Investigación de Inmunidad Innata en la Salud y en la Enfermedad, IMIB. Grupo de Investigación e Inmunología, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular B e Inmunología, Universidad de Murcia., España (Región de Murcia)
(3) Grupo de Investigación de Electroquímica Orgánica, Departamento de Química Orgánica, Universidad de Murcia., España (Región de Murcia)
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Los derivados de hidrazidas son compuestos con un grupo funcional hidrazida (-NR-NR2-) en su estructura química. Esta estructura puede recibir hasta cuatro sustituyentes, presentando así gran versatilidad para formar nuevos derivados con actividad biológica. En la actualidad existen diversos fármacos con derivados de hidrazidas como principio activo, como la isoniazida, utilizada en el tratamiento de la tuberculosis. En este estudio hemos analizado el potencial antitumoral de una serie de siete nuevos compuestos derivados de hidrazidas en un modelo in vitro de células tumorales, así como sus posibles efectos colaterales sobre células diferenciadas y microorganismos de la microbiota comensal.

Para estudiar el potencial antitumoral de los derivados de hidrazidas se evaluó su efecto citotóxico sobre la línea celular tumoral HL-60 (Human promyelocytic leukemia cells). Para ello, se analizó mediante ensayos de MTT la viabilidad de las células expuestas a diferentes dosis (0,05-25 ?M) y tiempos de incubación (24, 48 o 72 horas), a 37°C y 5% CO2. Por otro lado, para determinar si la actividad mostrada sobre la línea tumoral era una actividad anti-proliferativa específica y no un efecto citotóxico general que pudiera producir daños colaterales sobre células diferenciadas, se realizaron ensayos con las mismas condiciones de dosis y tiempos sobre células diferenciadas, utilizando como modelo celular macrófagos obtenidos de la diferenciación de la misma línea HL-60 mediante tratamiento con PMA. Adicionalmente, se determinó el efecto de esta serie de compuestos sobre dos microorganismos comensales: la bacteria E. coli DH5? y el hongo C. albicans SC5314, con el propósito de descartar efectos adversos sobre ellos. Para esto, los microorganismos fueron tratados con los compuestos y se incubaron durante 24 hrs (E. coli) y 48 hrs (C. albicans) en el equipo ClarioStar con mediciones de densidad óptica en intervalos de una hora.

El estudio de citotoxicidad de esta nueva serie de siete derivados de hidrazidas reflejó que el derivado BIFENIL presentaba un significativo efecto citotóxico sobre la línea tumoral de leucemia humana HL-60 con respecto a los controles sin tratamiento. Para evaluar el potencial citotóxico de este compuesto se determinó su IC50 a los distintos tiempos ensayados, obteniéndose valores de 2,44 ± 0,18 a las 24 horas, 1,39 ± 0,13 a las 48 horas, y 1,46 ± 0,19 a las 72 horas. Este compuesto, además, alcanzó niveles máximos de actividad persistentes en el tiempo, mostrando datos de citotoxicidad de 75,55 ± 3,52%, 78,44 ± 4,37% y 84,20 ± 5,18% a 24, 48 y 72 horas, respectivamente, cuando aplicamos la dosis más alta (25 µM). El análisis de los posibles daños colaterales del compuesto activo mostró que el derivado BIFENIL presentaba una baja citotoxicidad sobre las células diferenciadas a macrófagos con todas las dosis ensayadas. Finalmente, el estudio del potencial citotóxico sobre microorganismos comensales, demostró que este derivado activo no era tóxico ni para la bacteria E. coli, ni para el hongo C. albicans.

El derivado BIFENIL podría ser un potente agente antitumoral, ya que presenta una significativa actividad anti-proliferativa sobre la línea tumoral HL-60, con altos niveles de citotoxicidad y bajos valores de IC50, sin mostrar efectos colaterales significativos sobre las células diferenciadas y la microbiota comensal.