ACTI¹

(1) Área Científica y Técnica de Investigación (ACTI). Instituto Murciano de Investigación Biosanitaria (IMIB). Universidad de Murcia.

Se sabe que las técnicas de haploidización son herramientas útiles en fitomejoramiento. Estas técnicas tienen varias ventajas en comparación con los métodos convencionales de cultivo, ya que reduce el tiempo de producción de líneas 100% homocigóticas y contribuye a la eficiencia de la selección. La homocigosidad completa de plantas heterocigóticas puede lograrse en una sola generación en lugar de varias generaciones de autofecundación. Las plantas haploides pueden ser obtenidas mediante cultivo in vitro de anteras o microsporas aisladas (androgénesis), óvulos (ginegénesis) o recuperación in vitro de embriones partenogenéticos inducidos por polinización in situ con polen irradiado (partenogénesis).

El cultivo de las plantas, se realiza in vitro en cámaras de crecimiento en condiciones controladas de fotoperiodo (16h luz- 8h oscuridad), temperatura (240C) e intensidad luminosa (3000 luxes) en la Plataforma de Experimentación Agroforestal. Las cámaras disponen de un sistema de enfriamiento basal (bottom cooling) para evitar la condensación de agua en los frascos de cultivo, y por tanto prevenir el proceso de vitrificación que deteriora los cultivos. Se utiliza medio de cultivo MMN solidificado con agar, suplementado con sacarosa y ajustado a pH 5,8. Generalmente para evitar la formación de callo se prescinde de reguladores hormonales, pero en este caso es necesario aportar auxinas al medio. De la misma forma, es necesario añadir carbón activo para absorber sustancias tóxicas y el ABA, que impide la embriogénesis. Mediante un irradiador de rayos X, YXLON de 200 kV y 4,5 mA del Laboratorio de Radiactividad de la Plataforma de Radioprotección y Residuos se aplica diferentes dosis a partes vegetales de cucurbitáceas cultivadas en la Plataforma de Experimentación Agroforestal en condiciones controladas. El análisis de ploidía de las plántulas in vitro y la cuantificación de ADN se realiza por citometría de flujo tras la extracción de los núcleos y posterior tinción con DAPI en la Plataforma de Cultivo de Tejidos.

A pesar de obtener un bajo números de haploides, las cucurbitáceas son las plantas más exitosas para su obtención y la técnica más utilizada es la irradiación con rayos X. No se detectó aneuploidía. Todas las plantas resultantes exhibieron fenotipos normales. Los embriones haploides son fácilmente reconocibles por su forma y posición en la semilla, características en comparación con los embriones diploides normales de la misma edad.

El método descrito, en coordinación con otras plataformas del IMIB como Experimentación Agroforestal y Cultivo de Tejidos, indica que la irradiación con rayos X realizada en la Plataforma de Radioprotección y Residuos se revela como una técnica de elección para la obtención de haploides en plantas de interés en mejora vegetal con fines farmacológicos.